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更新時間：2024-11-05

兔胎盤絨毛膜細胞

商品屬性：

細胞簡介：

兔胎盤絨毛膜分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿浴ＬケP還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。絨毛膜是由滋養(yǎng)層和胚外中胚層的壁層構(gòu)成。胚泡植入子宮內(nèi)膜后，在胚泡表面形成許多絨毛樣的突起，以細胞滋養(yǎng)層為中軸，外裹合體滋養(yǎng)層，稱初級干絨毛。胚外中胚層長入初級干絨毛的中軸，使初級干絨毛變成了次級干絨毛。當絨毛膜的胚外中胚層內(nèi)形成血管網(wǎng)和結(jié)締組織，并與胚體內(nèi)的血管相通時，次級干絨毛改稱三級干絨毛。三級干絨毛末端的細胞滋養(yǎng)層細胞形成細胞滋養(yǎng)層殼。隨著胚胎發(fā)育，叢密絨毛膜與基蛻膜共同構(gòu)成了胎盤，而平滑絨毛膜則和包蛻膜一起逐漸與壁蛻膜融合。

方法簡介：

實驗室分離的兔胎盤絨毛膜采用-DNA酶聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔胎盤絨毛膜經(jīng)hCG免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔胎盤絨毛膜體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行