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更新時間：2024-11-05

兔淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

兔淋巴血管內(nèi)皮分離自淋巴血管組織；淋巴管由毛細(xì)淋巴管匯合而成。其形態(tài)結(jié)構(gòu)與靜脈相似，但管徑較細(xì)，管壁較薄，瓣膜較多且發(fā)達(dá)，外形呈串珠狀。淋巴管根據(jù)其位置分為淺、深二種。它們管位于皮下，常與淺靜脈伴行，收集皮膚和皮下組織的淋巴。深淋巴管與深部血管伴行，收集肌肉和內(nèi)臟的淋巴。淺、深淋巴管之間有廣泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常經(jīng)過一個或多個淋巴結(jié)，從而把淋巴細(xì)胞帶入淋巴液。主要功能是濾過淋巴液，產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，參與機(jī)體的免疫反應(yīng)。當(dāng)局部感染時，細(xì)菌、病毒或癌細(xì)胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴結(jié)腫大。如該淋巴結(jié)不能阻止和消滅它們，則病變可沿淋巴管的流注方向擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞（LEC）是襯覆于淋巴管內(nèi)表面的一種單層扁平上皮，是構(gòu)成淋巴管壁的主要結(jié)構(gòu)，參與維持體液平衡，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞再循環(huán)和機(jī)體的免疫反應(yīng)和組織液及蛋白質(zhì)的運(yùn)輸，在疾病過程中也起著重要作用。近年研究表明，LEC還在傷口愈合、淋巴管水腫和炎癥擴(kuò)散等病理過程中起重要作用，而且與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞主要功能：①調(diào)節(jié)體液、蛋白和組織壓力平衡；②為免疫系統(tǒng)的重要組成部分。淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞與主要病生理變化：①囊腫型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴結(jié)核。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；

　　3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長；

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔淋巴血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔淋巴血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔淋巴血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞傳代及凍存：

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

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