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更新時(shí)間:2024-11-05
兔附睪上皮細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
附睪: | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X8345 |
細(xì)胞簡介:
兔附睪上皮分離自附睪組織;附睪(Epididymis)是一個(gè)由曲折、細(xì)小的管子構(gòu)成的器官,一端接著輸精管(Ductusdeferens),一端接著睪丸(Testis)的曲細(xì)精管,具體結(jié)構(gòu)主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣,可分為頭、體、尾三部。精子離開睪丸后通過輸出小管進(jìn)入附睪。附睪具有暫存精液并分泌附睪液營養(yǎng)精子的功能,以促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟附睪的功能是暫存精子,促進(jìn)精子的進(jìn)一步成熟。精子在附睪內(nèi)獲得運(yùn)動(dòng)能力,總共停留8~17天,終達(dá)到功能上的成熟。在這個(gè)過程中,精子除了自身的因素,還受到附睪微環(huán)境的影響,這包括了一系列的物理、化學(xué)變化和精子形態(tài)的改變??梢哉f,附睪微環(huán)境正常穩(wěn)定是附睪發(fā)揮促成熟這一功能的必要條件。若附睪的功能發(fā)生異常,精子則不能成熟,引起不育。附睪上皮含有主細(xì)胞、基細(xì)胞、亮細(xì)胞等幾種類型細(xì)胞?;?xì)胞,其頂部離附睪管腔有一定距離,在附睪各部分,其形態(tài)沒有差別,一般認(rèn)為是貯備細(xì)胞;另一種主細(xì)胞,是維持附睪生理功能的物質(zhì)基礎(chǔ),在各區(qū)段的主細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)差別很大,這也反映出各區(qū)段的生理功能的差異。除上皮細(xì)胞外,附睪的管壁組織結(jié)構(gòu)也有規(guī)律性的變化,附睪管起始段平滑肌有自發(fā)地節(jié)律性收縮,而尾部平滑肌就沒有這種特點(diǎn),僅在射精一瞬間出現(xiàn)強(qiáng)烈的節(jié)律收縮。作為負(fù)責(zé)提供適合精子成熟微環(huán)境的附睪,具有活躍的分泌與吸收功能。其中,附睪上皮的電解質(zhì)和水分的轉(zhuǎn)運(yùn),對保持附睪內(nèi)合適的離子濃度和酸堿度,為精子成熟提供適宜的環(huán)境起著相當(dāng)重要的作用。睪丸的支持細(xì)胞每天能產(chǎn)生大量睪網(wǎng)液,如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網(wǎng)液,而從附睪排出的只不過幾百微升,也就是說睪丸分泌液有99%被附睪上皮重新吸收回體內(nèi)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,結(jié)扎輸精管時(shí)睪丸不會(huì)腫脹,但若結(jié)扎睪丸輸出小管,睪丸第二天就會(huì)腫脹,這就充分證實(shí)了附睪存在著強(qiáng)有力的吸收功能,但是重新吸收的意義尚不清楚。體外培養(yǎng)附睪上皮細(xì)胞對精子的發(fā)育、成熟,育,附睪生理基礎(chǔ)功能研究具有重要意義。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔附睪上皮采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔附睪上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔附睪上皮體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β1 英文名稱: Ttansforming Growth Factor -β1 英文縮寫: TGF-β1
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β2 英文名稱: Ttansforming Growth Factor -β2 英文縮寫: TGF-β2
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1 英文名稱: Tissue inhibitors of metalloproteinases 1 英文縮寫: TIMP-1
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2 英文名稱: Tissue inhibitors of metalloproteinases 2 英文縮寫: TIMP-2
整合素樣金屬蛋白酶與1型-7( (N端)抗體
TIP30蛋白抗體
CD22重組小鼠 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein
4(KLK4)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 4 (KLK4)
AGA重組人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 Protein
CD24 Protein Human 重組人 CD24 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白
4(KLK4)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 4 (KLK4)
CD24 Protein Human 重組人 CD24 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
CD22重組小鼠 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein
RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白
AGA重組人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 Protein
小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA pcr檢測試劑盒
Human soluble adhesion molecule (Sam) ELISA Kit 人可溶性粘附分子(Sam)試劑盒
Humancadherln-relatedneuronalreceptor1,C-1ELISAKit 人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(C-1)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitfor1,3-DPG(Human1,3-Disphosphoglycerate,ELISAKit人1,3-二0酸甘油酸
飲料比色法定量試劑盒20次
MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit小鼠腎損傷分子1(Kim-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔附睪上皮細(xì)胞大鼠釋放激素受體(GHR)試劑盒 ,英文名: GHR ELISA Kit
Porcine histamine (HIS) ELISA Kit 豬組胺(HIS)試劑盒
ELISA 小鼠腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子(mouse BDNF) 分裝
CLIAKitforL-LDH(HumanL-LactateDehydrogenase)ELISAKit人L-乳酸脫氫酶
通用型EBV(EPSTEIN-BARR)病毒定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次
ELISAKitCRP雞C反應(yīng)蛋白
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