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更新時(shí)間:2024-11-05
兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
肺靜脈 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X8340 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織;肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動(dòng)物中,把動(dòng)脈血由肺送回心臟的靜脈,是一個(gè)靜脈里流動(dòng)脈血的血管。左右1對(duì),共4條,兩條連接右肺,兩條連接左肺。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接,而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動(dòng)脈高壓,是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動(dòng)脈高壓。正常情況下,肺循環(huán)具有血壓低、阻力小和順應(yīng)性大的特點(diǎn),肺動(dòng)脈壓力高低取決于單位時(shí)間內(nèi)肺動(dòng)脈血流量和肺血管的阻力,要維持肺循環(huán)的低壓、低阻的狀態(tài),必須保證整個(gè)肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無(wú)阻,血液順利地由肺動(dòng)脈經(jīng)毛細(xì)血管進(jìn)入肺靜脈,再入左心室,經(jīng)過(guò)左心室收縮進(jìn)入體循環(huán),才能避免肺動(dòng)脈內(nèi)壓力升高。肺大靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細(xì)胞匯合,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),常交織成網(wǎng)狀;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。該細(xì)胞參與血管壁炎癥反應(yīng),保持靜脈管腔的通暢,還是多數(shù)動(dòng)脈疾病的靶細(xì)胞。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):成纖維細(xì)胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔肺大靜脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(-3)ELISAKit ELISA
小鼠神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(-4)ELISAKit ELISA
小鼠骨保護(hù)素(OPG)ELISAKit ELISA
小鼠B因子(BF)ELISAKit ELISA
AlkB同源蛋白8抗體
泛素蛋白連接酶L3抗體
CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein
0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)
IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein
CLEC4A Protein Human 重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白
HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
0脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)重組蛋白 Recombinant Glypican 1 (GPC1)
CLEC4A Protein Human 重組人 CLEC4A / CLECSF6 / DCIR 蛋白
CD48重組人 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein
HA Protein H9N2 重組甲型流感 H9N2 (A/Hong Kong/35820/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白
IDI2重組人 IDI2 蛋白 Protein
小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA pcr檢測(cè)試劑盒
Human pemphigus foliaceus (PF) ELISA Kit 人落葉型天皰瘡抗體(PF)試劑盒
HumanCompleme1q,C1qELISAKit 人補(bǔ)體1q(C1q)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
DuckIerleukin1,IL-1試劑盒鴨白介素1(IL-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
載體/DNA產(chǎn)物去0酸化處理試劑盒10次
Mousedeoxypyridinoline,DPDELISAKit小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞大鼠熱休克蛋白β8(HSPβ8)試劑盒 ,英文名: HSPβ8 ELISA Kit
Mouse vascular endothelial cell growth factor D (VEGF-D) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子D(VEGF-D)試劑盒
RatAquaporin4,AQP-4ELISAKit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)pcr檢測(cè)試劑盒分裝
CLIAKitforGuineapigImmunoglobulinG,IgGELISAKit豚鼠免疫球蛋白G
細(xì)胞長(zhǎng)鏈脂酰氧化酶(acyl-CoAoxidase)活性比色法定量試劑盒20次
RatTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISAKit大鼠腫瘤特異生長(zhǎng)因子/腫瘤相關(guān)因子(TGSF)試劑盒規(guī)格:96T/48T