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更新時(shí)間:2024-11-05
大鼠退行性椎間盤髓核細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
椎間盤 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 梭形、多角形 | YS-01X8263 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠退行性椎間盤髓核分離退行性椎間盤組織;椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,分為中央部的髓核,富于彈性的膠狀物質(zhì);周圍部的纖維環(huán),由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板,是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來(lái)。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織,能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。髓核,是乳白色半透明膠狀體,富于彈性,為椎間盤結(jié)構(gòu)的一部分,位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。嬰幼兒時(shí)期的髓核含水量為80%-90%,即使到了老年,其含水量也在70%上下。髓核在出生時(shí)體積大而松散,位于椎間盤的中央,至成年時(shí)位置移至椎間盤的中后部;在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復(fù)合體、膠原纖維和纖維軟骨,隨著年齡的增長(zhǎng),髓核中的蛋白多糖解聚增多,水分逐漸減少,膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠退行性椎間盤髓核采用膠原酶-混合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠退行性椎間盤髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每3-4天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠退行性椎間盤髓核體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠半乳糖6酯酶試劑盒 小鼠半乳糖6酯酶試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠半乳糖6酯酶試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠半乳糖6酯酶試劑盒、小鼠半乳糖6酯酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑試劑盒 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑試劑盒、小鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲酸蛋白酶抑制劑eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠內(nèi)毒素試劑盒 小鼠內(nèi)毒素試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠內(nèi)毒素試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠內(nèi)毒素試劑盒、小鼠內(nèi)毒素eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒 小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠膜聯(lián)蛋白試劑盒、小鼠膜聯(lián)蛋白eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human nerve protective factor (CVNPF) ELISA Kit 人神經(jīng)保護(hù)因子(CVNPF)試劑盒
HumanleukocyteaigenC,HLA-CELISAKit 人類白細(xì)胞抗原C(HLA-C)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanai-hepatitisBviruscoreaibody,HBcAb試劑盒人抗乙型肝病毒核心抗體(HBcAb)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物0酸葡萄糖異構(gòu)酶(phosphoglucoseisomerase;GPI)活性光譜法定量試劑盒20次
Humanverylowdensitylipoproteieceptor,VLDLRELISAKit人低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒規(guī)格:96T/48T
BHMT抗體
囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC20 抗體
FGFR1重組小鼠 FGFR1 / CD331 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽) Protein
Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1 0.5mgApaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(CT) 凋亡蛋白活性因子-1(抗原)
UBA1重組人 UBE1 / UBA1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
EPHA4 Protein Human 重組人 EphA4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
DDR2 Protein Rat 重組大鼠 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
白介素31(IL31)重組蛋白 Recombinant Interleukin 31 (IL31)
EPHA4 Protein Human 重組人 EphA4 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)
SERPINI1重組小鼠 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein
IL1R1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL1R1 蛋白
CRIP2重組人 CRIP2 蛋白 Protein
大鼠退行性椎間盤髓核細(xì)胞大鼠白介素2可溶性受體(IL-2sR)試劑盒 ,英文名: IL-2sR ELISA Kit
Mouse ierleukin 7 (IL-7) ELISA Kit 小鼠白介素7(IL-7)試劑盒
ELISA 小鼠類胰島素生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-2(mouse IGBPF-2) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIMA(MouseIschemiaModifiedAlbumin)ELISAKit小鼠缺血修飾白蛋白
通用型瓜類細(xì)菌性果斑病(西瓜果斑)(Acidovoraxavenaesubsp.ciulli;WatermelonFruitBlotch)試劑盒20次
ELISAKitINHBP大鼠抑制素結(jié)合蛋白
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