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更新時(shí)間：2024-11-07

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細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
蛋白酶抑制因子2檢測(cè)試劑盒  英文名稱:2β,6β,15α-Trihydroxy-ent-kaur-16-ene  純度：95%

粒細(xì)胞趨化蛋白-2檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Taxumairol B  純度：≥97%

同種異體移植炎癥因子1檢測(cè)試劑盒  英文名稱:16-Hydroxy-8(17),13-labdadien-15,16-olid-19-oic acid  純度：≥98%

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體1檢測(cè)試劑盒  英文名稱:ent-Labda-8(17),13E-diene-3β,15,18-triol  純度：≥98%

聚(ADP核糖)聚合酶1檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Coronarin D methyl ether  純度：≥98%

乙型肝炎病毒表面IgG抗體檢測(cè)試劑盒  英文名稱:(-)-Phyllocladene  純度：≥95%

白細(xì)胞介素28D檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Yunnancoronarin A  純度：≥98%

白喉IgG抗體檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Isodocarpin  純度：≥98%

電壓門控鉀通道抗體檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Heudelotinone  純度：≥95%

檢測(cè)試劑盒  英文名稱:ent-Kaurane-16β,19,20-triol  純度：≥95%

乳頭瘤病毒16型E6蛋白檢測(cè)試劑盒  英文名稱:6-O-Nicotinoylbarbatin C  純度：≥98%

檢測(cè)試劑盒  英文名稱:15,16-Epoxy-12-hydroxylabda-8(17),13(16),14-triene  純度：≥98%

血紅素氧合酶1檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Scutebarbatine X  純度：≥98%

白介素8受體α檢測(cè)試劑盒  英文名稱:15-Methoxypatagonic acid  純度：≥98%

白介素8受體β檢測(cè)試劑盒  英文名稱:Chinensine B  純度：≥98%
GV3101（pJlC SA-rep）感受態(tài)細(xì)胞phosphoHNF4 (Ser304)  化肝細(xì)胞核因子4α一抗    * 0.1ml Potassium iodide solution

SNAPC3  SNAPC3蛋白一抗    * 0.2ml Rosolic acid

phosphoTau protein(Thr181)  化微管相關(guān)蛋白一抗    * 0.1ml Rosolic acid

phosphoGluR1(Ser836)  化谷氨受體1一抗    * 0.1ml Sodium oxalate solution for volumetric analysis

SCNN1D/δENaC  上皮鈉離子通道蛋白D一抗    * 0.2ml Thymolblue

PhosphoTrkA (Ser791)  化酪氨激酶A一抗    * 0.1ml Thymolblue

AGPHD1  氨基糖苷類結(jié)構(gòu)域蛋白一抗    * 0.2ml Quinaldine Red

PTRF  RNA聚合酶1和轉(zhuǎn)錄釋放因子一抗    * 0.2ml Phenolphthalein
操作方法：
1. 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物) 并用手EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。
基本共性:
1、所有的細(xì)胞表面均有由磷脂雙分子層與鑲嵌蛋白質(zhì)及糖被構(gòu)成的生物膜，即細(xì)胞膜。
2、所有的細(xì)胞都含有兩種核酸：即DNA與RNA。
3、作為遺傳信息復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的載體。
4、作為蛋白質(zhì)合成的機(jī)器—核糖體，毫無例外地存在于一切細(xì)胞內(nèi)，核糖體，是蛋白質(zhì)合成的機(jī)器，在細(xì)胞遺傳信息流的傳遞中起重要作用。
5、所有細(xì)胞的增殖都以一分為二的方式進(jìn)行分裂。
6、能進(jìn)行自我增殖和遺傳
7、新陳代謝
8、細(xì)胞都具有運(yùn)動(dòng)性，包括細(xì)胞自身的運(yùn)動(dòng)和細(xì)胞內(nèi)部的物質(zhì)運(yùn)動(dòng)
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
產(chǎn)品僅用于科研采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。