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更新時間：2024-11-05

大鼠精原細胞

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細胞簡介：

大鼠精原分離自睪丸組織；睪丸呈微扁的卵圓形，表面光滑，覆蓋著鞘膜臟層；深部是質地堅韌的白膜，在睪丸后緣增厚并進入睪丸，形成睪丸縱膈，縱膈發(fā)出許多睪丸小隔深入睪丸實質，將實質分為睪丸小葉，數量約為100～200。每個小葉內約有2～4條生精小管，具有產生精子的作用；生精小管之間的結締組織中有睪丸間質細胞，具有產生雄激素的作用。生精小管首先匯合成為精直小管(也稱直精小管)，精直小管進入睪丸縱膈形成睪丸網，之后睪丸網發(fā)出12～15條輸出小管通過睪丸后上緣進入附睪。生精小管的生精上皮是精子產生的地方，由生精細胞和支持細胞構成，成人的生精小管有30～70cm長。精子的產生過程包括生精細胞的分化、支持細胞的作用、雄激素的調節(jié)等。生精細胞并不是一種細胞，它是多種細胞的統(tǒng)稱，包括精原細胞、初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞、精子。前者依次發(fā)育分化為后者，且依次從生精上皮的基部到管腔面排列，最終形成精子進入到管腔之中，并借助生精上皮外側的肌樣細胞的收縮作用向下一級管腔移動。精原細胞是指由睪丸精子管上皮的原始生殖細胞經過多次有絲分裂而形成的細胞。原始的胚細胞經分化形成精原細胞，精原細胞經復制形成初級精母細胞，初級精母細胞經過減數第一次分裂后形成次級精母細胞，再經過減數第二次分裂形成精細胞。精細胞經過變形最終形成精子。精原細胞屬于雄性生殖細胞的早期發(fā)育階段，能不斷地進行有絲分裂，增加細胞數量，并分化為精母細胞。精原細胞貼近基膜，細胞呈圓形，核大而圓，梁色深。精原細胞在男性的一生中具有幾乎無限分裂的能力，而且分裂過程中能夠保持原有的基因性狀不變。在增殖過程中，通過精原細胞的分裂和分化，由精原細胞產生精母細胞，進入成熟分裂，因而通過增殖可大大增加精母細胞的數量。按理論推算，一個精原細胞通過數次細胞分裂，可形成上百個初級精母細胞。但在生精過程早期，生精細胞很易發(fā)生變性，故實際上少于這個數字。在精原細胞的增殖過程中，有一部分Ad型精原細胞不再繼續(xù)分裂，而是保留下來，成為新的精原干細胞，因此通過增殖不僅能使精原干細胞不斷得到更新，且能使精原干細胞保持一定數量，從而使精子的產生持續(xù)地進行下去，不會枯竭。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠精原采用混合酶多步消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠精原經AP(堿性磷酸酶)免疫組化染色鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、GDNF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：圓形、橢圓形

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠精原體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。

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