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更新時(shí)間:2024-09-12
操作步驟:
1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2)根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4)γ干擾素elisa試劑盒 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
試劑和樣本的控制方法:
一、試劑
1.試劑的選擇:國(guó)家明確要求要采用批批檢定的形式對(duì)ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照進(jìn)行,已獲得國(guó)家承認(rèn)的“三證”,每一個(gè)產(chǎn)品都有對(duì)應(yīng)的批號(hào),只要客戶(hù)提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會(huì)有過(guò)期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測(cè)定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿(mǎn)足后面的測(cè)定需求。
二、樣本
1.內(nèi)源性干擾因素:包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、高濃度的非特異免疫球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
類(lèi)風(fēng)濕因子的控制方法:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
③檢測(cè)抗原時(shí),可用加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;
補(bǔ)體的控制方法:
①用EDTA稀釋標(biāo)本;
②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;
2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血、細(xì)菌污染、保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或凝固不全等;
控制方法:采血時(shí)規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時(shí)采用無(wú)菌試管,經(jīng)檢測(cè)后再低溫凍存;保存時(shí)間不宜過(guò)久,檢測(cè)時(shí)盡量采用新鮮標(biāo)本;對(duì)于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。
具有如下優(yōu)點(diǎn):
一、高效、靈敏、特異的抗體;
二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;
五、性?xún)r(jià)比非常好,節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。
anti- AHSG antibody大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)ELISA試劑盒
anti- AICDA antibody大鼠新生甲狀腺素(NN-T4)ELISA試劑盒
anti- AIDA antibody大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒
anti- AIF antibody大鼠N-乙?;?絲氨酰-天門(mén)冬酰-賴(lài)氨酰-脯氨酸(AcSDKP)ELISA試劑盒
anti- AIF1 antibody大鼠肌球蛋白(MYS)ELISA試劑盒
anti- AIFM3 antibody大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒
anti- AIG1 antibody大鼠髓過(guò)氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA試劑盒
anti- AIM2 antibody大鼠髓過(guò)氧化物酶(MPO)ELISA試劑盒
anti- AIP/ARA9 antibody大鼠髓磷脂堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒
anti- AIPL1 antibody大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)ELISA試劑盒
anti- AIRE antibody大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)ELISA試劑盒
anti- Ajuba antibody大鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒
anti- AK1 antibody大鼠Smad7 ELISA試劑盒
anti- AK2 antibody大鼠Smad1 ELISA試劑盒
anti- AK2 antibody大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)ELISA試劑盒
γ干擾素elisa試劑盒 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶 -9(mouse MMP-9)Human DCP(Des-gamma carboxyprothrombin) ELISA Kit
Human WNT3A(Protein Wnt-3a) ELISA Kit
小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子 (mouse NGF)Human SMAD2(Mothers against decapentaplegic homolog 2) ELISA Kit
Human Smad3/MADH3(Mothers Against Decapentaplegic Homolog 3) ELISA Kit
小鼠骨橋蛋白 ( mouse Osteopontin)Human PPRC1(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator-related protein 1) ELISA Kit
Human CD24(Signal transducer CD24) ELISA Kit
小鼠血小板衍化生長(zhǎng)因子 (mouse PDGF-AA)Human RPESP(RPE-spondin) ELISA Kit
Human SEMA3G(Semaphorin-3G) ELISA Kit
小鼠血小板衍化生長(zhǎng)因子 -B(mouse PDGF-AB)Human ZG16B(Zymogen granule protein 16 homolog B) ELISA Kit
Human ZG16(Zymogen granule membrane protein 16) ELISA Kit
小鼠血小板衍化生長(zhǎng)因子 -BB(mouse PDGF-BB)Human LDHA(L-lactate dehydrogenase A chain) ELISA Kit
Human LDHC(L-lactate dehydrogenase C chain) ELISA Kit
小鼠趨化因子 (mouse RANTES)Human UCN(Urocortin) ELISA Kit
Human SOD3(Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit
小鼠干細(xì)胞因子 (mouse SCF)Human GP6(Platelet glycoprotein VI) ELISA Kit
Human LPCAT3(Lysophospholipid acyltransferase 5) ELISA Kit
mouse SDF-1 aHuman OXM(Oxyntomodulin) ELISA Kit
Human AQP9(Aquaporin-9) ELISA Kit
小鼠可溶性 E- 選擇素 (mouse sE-Selectin/ sCD62E)Human SOD2(Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial) ELISA Kit
Human AKR1B1(Aldose reductase) ELISA Kit
小鼠可溶性 L- 選擇素 (mouse sL-Selectin/ sCD 62L )Human ADIPOR1(Adiponectin receptor protein 1) ELISA Kit
Human PRDX1(Peroxiredoxin-1) ELISA Kit
小鼠可溶性 P- 選擇素 (mouse sP-Selectin/ sCD62P)Human ITGB1(Integrin beta-1) ELISA Kit
Human MEP1A(Meprin A subunit alpha) ELISA Kit
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 -β1 (mouse TGF-β1)Human BMX(Cytoplasmic tyrosine-protein kinase BMX) ELISA Kit
Human LPCAT2(Lysophosphatidylcholine acyltransferase 2) ELISA Kit
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子 -1(mouse TIMP-1)Human TPH2(Tryptophan 5-hydroxylase 2) ELISA Kit
Human TPH1(Tryptophan 5-hydroxylase 1) ELISA Kit
小鼠腫瘤壞死因子 - a (mouse TNF- a )Human NDST2(Bifunctional heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase 2) ELISA Kit
Human APLN(Apelin) ELISA Kit
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀(guān)察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。