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廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
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更新時(shí)間:2024-10-30
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
腦組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X7396 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
人腦微血管內(nèi)皮分離自腦組織;腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分,它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞,能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦,大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有一些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對(duì)維持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,在腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同,大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子,調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性,內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。其主要特征如下:①腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接,產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗,延遲細(xì)胞旁的通量;②腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu),其液相物質(zhì)胞飲水平較低;③腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對(duì)稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng),從而產(chǎn)生“兩極分化"的表現(xiàn)型。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、最后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腦微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠骨成型蛋白受體Ⅱ(mouse BMP-R2) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠腦肽(mouse BNP) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠N端前腦素(mouse -proBNP) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠骨唾液酸蛋白(mouse BSP) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat tarate resista acid phosphatase 5b (ACP-5b) ELISA Kit 大鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)試劑盒
HumanStaphylococalproteinA,SPAELISAKit 人葡萄球菌蛋白A(SPA)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanAngiotensinⅠConveingEnzyme,ACEⅠ試劑盒人血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅠ)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物鈣鎂ATP酶(Ca++/Mg++-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次
Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISAKit人γ谷氨酰半胱合成酶(γ-ECS)試劑盒規(guī)格:96T/48T
細(xì)胞分化蛋白SEPT10抗體
FAM125A蛋白抗體
LMAN2L重組人 LMAN2L 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
SYK (Spleen tyrosine kinase 0.5mgSYK (Spleen tyrosine kinase) 非受體型酪激酶(抗原)
IL1RAP重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 Protein
DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / CD26 蛋白
TNF Protein Human 重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白
SYK (Spleen tyrosine kinase 0.5mgSYK (Spleen tyrosine kinase) 非受體型酪激酶(抗原)
DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / CD26 蛋白
LMAN2L重組人 LMAN2L 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
TNF Protein Human 重組人 TNF-alpha / TNFA 蛋白
IL1RAP重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 Protein
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠細(xì)胞外基質(zhì)0酸糖蛋白(MEPE)試劑盒 ,英文名: MEPE ELISA Kit
Mouse nerve growth factor (NGF) ELISA Kit 小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)試劑盒
MouseN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 小鼠Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHSVIAb(HumanHerpessimplexvirusIaibody)ELISAKit人單皰疹病毒Ⅰ型抗體
細(xì)胞JAK3激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitIL-2R大鼠白介素2受體
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng);
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。
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