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產(chǎn)品型號:
廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
訪問量:65
更新時間:2024-10-31
人椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
椎間盤組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 梭形、多角形 | YS-01X7530 |
細(xì)胞簡介:
人椎間盤纖維環(huán)分離自椎間盤組織;椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,由軟骨板、纖維環(huán)、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板,是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環(huán)成為堅實的組織,能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷。纖維環(huán)的前側(cè)及兩側(cè)較厚,而后側(cè)較薄。纖維環(huán)的前部有強大的前縱韌帶,后側(cè)的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環(huán)細(xì)胞密度為9000個細(xì)胞/mm3,其外層的細(xì)胞呈梭型,主要屬于纖維細(xì)胞,內(nèi)層細(xì)胞呈圓形,主要屬于軟骨細(xì)胞。在培養(yǎng)的情況下,用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn),它們的核較圓,核仁較明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體多,為橢圓形,有的可看到雙層單位膜,由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復(fù)合體和分泌顆粒,纖維環(huán)細(xì)胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,保證纖維環(huán)生理代謝活動所需的構(gòu)造物質(zhì)的供給。一但這種供給減少,纖維環(huán)的生物性能就會減弱,椎間盤開始退變。
方法簡介:
公司實驗室分離的人椎間盤纖維環(huán)采用膠原酶-聯(lián)合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人椎間盤纖維環(huán)經(jīng)Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
十六烷基基溴化胺 50g
CTAB 250g
5’-三0酸胞苷三鹽 50mg
CTP 100mg
豚鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 ,英文名: ANG-Ⅱ ELISA Kit
Human proteolipid protein (PLP) ELISA Kit 人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體(PLP)試劑盒
Monkeyacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit乙酰受體抗體(AChRab)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforBMG/Beta2-MG(HumanBeta2-microglobulin)ELISAKit人β2微球蛋白
細(xì)菌內(nèi)毒素濁度法定量試劑盒20次
RabbitmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/RLAⅡELISAKit兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)試劑盒規(guī)格:96T/48T
E選擇素抗體
胱抑素C單克隆抗體(包被)
EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
MMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1 0.5mgMMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1
SERPINA12重組人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 Protein
IL10 Protein Human 重組人 IL10 / Interleukin-10 蛋白
F7 Protein Mouse 重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白
MMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1 0.5mgMMP-1 基質(zhì)金屬蛋白酶-1
IL10 Protein Human 重組人 IL10 / Interleukin-10 蛋白
EPHA4重組食蟹猴 EphA4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
F7 Protein Mouse 重組小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 蛋白
SERPINA12重組人 Vaspin / SerpinA12 蛋白 Protein
人椎間盤纖維環(huán)細(xì)胞大鼠尿卟啉原脫羧酶(UROD)試劑盒 ,英文名: UROD ELISA Kit
Monkey E selectin (E-Selectin/CD62E) ELISA Kit 猴E選擇素(E-Selectin/CD62E)試劑盒
RatvonWillebrandFactor,vWFELISAKit 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforGM-CSFAb(Humanai-Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactoraibody)ELISAKit人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體
細(xì)胞氧化酶(DAO)活性熒光定量試劑盒20次
RatSuperOxidaseDimase,SODELISAKit大鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。
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