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更新時間:2024-10-31
兔肌源性干細胞
商品屬性:
組織來源 | 產品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨骼肌組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7080 |
細胞簡介:
兔肌源性干分離自肌肉組織;肌源性干細胞(MDSCs)屬于成體多能干細胞,具有多細胞系分化和自我更新能力。通過誘導刺激,MDSCs可以分化為脂肪、骨骼、軟骨、平滑肌和神經細胞等多種細胞和組織類型;作為基因治療和組織工程的供體細胞,已成為治療心肌梗死、Duchenne氏肌營養(yǎng)不良等疾病的研究熱點;近年來,肌源性干細胞在治療尿失禁等方面的應用逐步得到重視。需注意的是,肌源性干細胞主要存在于骨骼肌組織中,只是成熟組織的很少部分細胞;平時處于靜止狀態(tài),在細胞應激和組織缺失時才會激活;并且隨著年齡的增加,所含細胞數(shù)量逐漸減少,而目前臨床疾病的治療主要是針對成體進行。肌源性干細胞的體外擴增對細胞移植和干細胞介導的基因治療至關重要。對肌源性干細胞的擴增研究發(fā)現(xiàn),EGF、FGF-2和SCF可以通過減數(shù)分裂或促使不分裂細胞進入有絲分裂周期,從而刺激細胞增生。更重要的是,細胞因子誘導的體外擴增可以通過自我更新不刺激細胞分化,從而保持干細胞表型。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,應將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
公司實驗室分離的兔肌源性干采用膠原酶--聯(lián)合消化法結合密度梯度離心、差速貼壁法,最后通過肌源性干細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的兔肌源性干經Sca-1免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態(tài)優(yōu)良
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
公司正在出售的產品:
小鼠轉酶試劑盒 小鼠轉酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠轉酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠轉酶試劑盒、小鼠轉酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠基轉移酶試劑盒 小鼠基轉移酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠基轉移酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠基轉移酶試劑盒、小鼠基轉移酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠表皮生長因子試劑盒 小鼠表皮生長因子試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠表皮生長因子試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠表皮生長因子試劑盒、小鼠表皮生長因子eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠棒狀桿菌試劑盒 小鼠棒狀桿菌試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠棒狀桿菌試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:小鼠棒狀桿菌試劑盒、小鼠棒狀桿菌eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
小鼠己糖激酶(HK)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human sorbitol dehydrogenase (SDH) ELISA Kit 人脫氫酶(SDH)試劑盒
HumanDNABindingProtein,DBPELISAKit 人DNA結合蛋白(DBP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanAi-glucoprotein210,GP210試劑盒人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物賴羥化酶(lysylhydroxylase)活性比色法定量試劑盒20次
HumanVitaminA,VAELISAKit人A(VA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
P物質抗體
連接粘附分子2抗體
NRP1重組人 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
晚期糖基化終末產物受體(AGER)重組蛋白 Recombinant Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor (AGER)
LALBA重組人 LALBA / Alpha-lactalbumin 蛋白 (Fc 標簽) Protein
EPCAM Protein Human 重組人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白
HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
晚期糖基化終末產物受體(AGER)重組蛋白 Recombinant Advanced Glycosylation End Product Specific Receptor (AGER)
EPCAM Protein Human 重組人 EpCAM / TROP-1 / TACSTD1 蛋白
NRP1重組人 Neuropilin-1 / NRP1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/WSN/1933) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
LALBA重組人 LALBA / Alpha-lactalbumin 蛋白 (Fc 標簽) Protein
兔肌源性干細胞大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)試劑盒 ,英文名: GMCSF/CSF2 ELISA Kit
Mouse keratinocyte aocrine factor (KAF) ELISA Kit / amphiregulin (AR) ELISA Kit 小鼠角化細胞內分泌因子(KAF)試劑盒/雙調蛋白(AR)試劑盒
Mousebonemorphogeneticproteins,BMPsELISAKit 小鼠骨形成蛋白(BMPs)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanpaxillin,PaxELISAKit人樁蛋白
同位素[γ32P]ATP激酶標記微衛(wèi)星擴增試劑盒20次
ELISAKitPIAb-IgG/IgM大鼠0脂酰肌醇抗體IgG/IgM